血小板中含有很多不同的細(xì)胞生長(zhǎng)因子,包括PDGF, VEGF,EGF等,存在血小板顆粒中的大量生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子可以通過凝血酶激活和凝固自然釋放,也可以通過冷凍/解凍介導(dǎo)的血小板溶解、超聲或化學(xué)治療人工釋放。以不同的釋放策略制備的人血小板裂解物被視為可以替代胎牛血清(FBS)作為培養(yǎng)基補(bǔ)充劑的合適選擇,使人類細(xì)胞在無動(dòng)物血清條件下高效增殖,在體細(xì)胞治療和組織工程中具有廣泛的應(yīng)用前景。
血小板裂解物的制備方法有哪幾種?
誘導(dǎo)血小板釋放生長(zhǎng)因子和其他生物活性分子的四大方法:
(1)多次冷凍/解凍循環(huán)(反復(fù)凍融法):
多次冷凍/解凍循環(huán)是常見的簡(jiǎn)單有效和經(jīng)濟(jì)的方式誘導(dǎo)血小板激活釋放因子。典型的情況是,濃縮的血小板在-80℃時(shí)被休克冷凍,37℃時(shí)解凍,從而使血小板激活和碎裂。
(2)直接激活法:
這種方法是加入鈣鹽溶液(通常是CaCl2),以激活內(nèi)源性凝血酶,從而纖維蛋白形成和血小板脫顆粒。也有人或重組凝血酶的直接激活,但重組凝血酶的使用可能會(huì)使HPL用于細(xì)胞治療的監(jiān)管和批準(zhǔn)復(fù)雜化。
(3)聲波降解法:
多年來,超聲單獨(dú)或與冷凍/解凍循環(huán)相結(jié)合也被用作一種快速、高效和經(jīng)濟(jì)高效的釋放血小板的方法。在20kHz頻率下超聲作用30分鐘可有效釋放血小板顆粒含量。
(4)溶劑/洗滌劑 (S/D)處理:
從制備工藝上來說,S/D處理法略微復(fù)雜。用1%磷酸三丁酯(TNBP)和1%的TritonX-100在30℃下處理新鮮冷凍血漿(FFP)4小時(shí),制備S/D-FFP。添加的試劑用大豆油萃取和不溶性C18樹脂層析除去。用S/D-FFP免疫家兔,然后用未經(jīng)處理的FFP吸附誘導(dǎo)的抗體,證實(shí)沒有新的免疫原的形成。這種方法還有一個(gè)好處就是可以滅活被脂質(zhì)包裹的病毒。